| UF2471 ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS (UF2471) |
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| Duración en horas: 60 |
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| OBJETIVOS |
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- Aplicar técnicas de PCR y de RT-PCR, teniendo en cuenta protocolos e indicando sus aplicaciones.
- Aplicar técnicas de hibridación con sondas genéticas y de análisis de fragmentos de ADN, siguiendo protocolos preestablecidos.
- Aplicar la técnica de secuenciación de fragmentos de ADN según protocolos preestablecidos.
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| CONTENIDOS |
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UNIDAD FORMATIVA 1. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
- Material y métodos
Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
- El ADN
- Los enzimas
- Los nucleótidos
- Los cebadores
- Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
Electroforesis y técnicas relacionadas.
- Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
- Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
- Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
Hibridación de ácidos nucleicos.
- Factores que influyen en la hibridación.
- Composición de las bases.
- Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
- Concentración y tamaño de la sonda
- Concentración ADN diana
- Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
- Marcaje de una sonda monocadena
- Hibridación: mezcla y renaturalización
- Detección de los híbridos
- Medio de reacción
- Polímeros inertes
- Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
- Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
Análisis de fragmentos de ADN.
- Método Southerm
- Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
- Aplicaciones del Método Southerm
- Mapas de restricción
- Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
Secuenciación.
- Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
- Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
- Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
- Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
- Fundamento: hibridación con sondas
- Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting
- Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras
Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
Bioinformática. Bases de datos de genómica.
- Introducción a la Bioinformática
- Consulta de Bases de datos en biología molecular
- Alineamiento de secuencias
- Predicción de genes
- Introducción a los microarrays de DNA
UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA
Genoma: células, cromosomas y genes.
- Definición de genoma, gen y cromosoma
- Organización, estabilización y localización del genoma
Estructura y función de los genes y cromosomas.
- Estructura del ADN
- Estructura del ARN
- El código genético
- Secuencias codificantes versus no codificantes
Bases cromosómicas de la enfermedad.
- Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
- Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
- Anomalías de la estructura de los cromosomas
Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
- Genético
- Congénito
- Hereditario
Genética de las enfermedades comunes.
- Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
- Modelos generados por transgénesis
- Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
- Modelos generados por transgénesis condicional
Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
- Modelos animales del desarrollo embrionario
- Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
- Diagnóstico citogenético
- Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
Diagnóstico en medicina legal y forense.
- VNTR
- STR
Modelos animales de enfermedad de base genética.
- Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
- Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc. |
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