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UF2470 TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS DE MUESTRAS BIOLÓGICAS (UF2470)
 
Duración en horas:  60
OBJETIVOS  
- Aplicar técnicas de extracción, cuantificación y purificación de ADN y/o ARN en muestras biológicas, siguiendo protocolos y normas de seguridad.
- Aplicar técnicas de extracción, cuantificación y purificación de proteínas en muestras biológicas, siguiendo protocolos y normas de seguridad.
- Aplicar técnicas de separación y purificación de fragmentos de ADN y de proteínas mediante electroforesis.
- Aplicar técnicas de separación e identificación de proteínas mediante técnicas de cromatografía, inmunodetección y proteómica.
CONTENIDOS  
UNIDAD FORMATIVA 1. TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS DE MUESTRAS BIOLÓGICAS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. OBTENCIÓN, MANIPULACIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS
Tipos de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- Extracción de ADN (a partir de sangre, tejidos o células en cultivo, células bucales,…)
- Extracción de ARN (mediante tiocianato de guanidina, urea-cloruro de lítio, purificación de poli(A)-ARN,
Determinación analítica. Perfil analítico. Cartera de servicios.
- Determinación de ácidos nucleicos
- Separación analítica y preparativa del ADN (electroforesis analítica, geles de agarosa, …)
Errores más comunes en la manipulación de las muestras.
- Identificación y etiquetado de las muestras
- Contaminación (por RNAsas, DNA,…)
- Degradación enzimática
Características generales de la obtención y procesamiento de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- Obtención de ADN y ARN a partir de tejidos líquidos (anticoagular)
- Inhibidores RNAsas
Prevención de riesgos en la obtención, manipulación y procesamiento de muestras biológicas.
- Recepción o toma de muestras. Medidas preventivas
- Precauciones generales relativas al laboratorio
- Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- Reglas de higiene personal
UNIDAD DIDÁCTICA 2. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS
Etiquetado e identificación de las muestras.
Sistemas y formatos de archivos. Sistemas de almacenamiento.
Equipos de almacenamiento (-20ºC, - 80º C)
Transporte de muestras (ADN: descongeladas, tubos estabilizadores ARN, tiempo de transporte recomendado 72 horas. ARN, congelado mediante agentes crioprotectores y con inhibidores de ARNAsas).
Prevención de riesgos en la conservación y transporte de muestras biológicas.
- Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- Reglas de higiene personal
- Almacenamiento de muestras biológicas. Zonas de acceso restringido. Contenedores específicos. Manejo con EPIs
- Transporte de material biológico. Sistema básico de embalaje. Identificación
UNIDAD DIDÁCTICA 3. BIOLOGÍA MOLECULAR: ADN, ARN Y PROTEÍNAS
Composición molecular, estructura y función de los ácidos nucleicos.
- Composición química y estructura de los ácidos nucleicos: Nucleótidos de importancia biológica y Factores que estabilizan la doble hélice
- Funciones de los ácidos nucleicos
Descripción de las enzimas asociadas a los ácidos nucleicos.
- Endonucleasas (Tipo 1 y 2)
- Polimerasas
- Ligasas
- Nucleasas
- Fosfatasas
- Quinasas
- ARNasas
Replicación del ADN.
- Modo semiconservativo
- Horqueta de replicación
- Enzimas que intervienen en el proceso
- Molécula accesoria: Iniciador
Transcripción del ADN y su control.
- Proceso: Cadena molde o antisentido. ARNm o transcripto primario. Enzima que dirige: polimerasa de ARN
- Modificaciones postranscripcionales.
Mecanismos de reparación del ADN.
- Agentes genotóxicos y mecanismos de reparación del DNA
- Reparación de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación
- Remoción de grupos metilo
- Bases mal apareadas
- Metilación del DNA
- Reparación del DNA durante o después de su replicación
- Reparación de cortes en ambas cadenas del DNA
- Sistemas De reparación de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair)
- Mecanismos de reparación de DNA: BER (Base escisión Repair)
Mutaciones del ADN, alteraciones en las proteínas que sintetizan y enfermedades asociadas.
- Alteraciones que puede sufrir el ADN: Mismatch (mal apareamiento), Desaminación, Pérdida de bases, Unión covalente entre bases de la misma cadena, Unión de grupos alquilo, Ruptura de simple cadena (nick) y Ruptura de doble cadena
- Alteraciones en las proteínas que se sintetizan y enfermedades asociadas. Desnaturalización
Estructura y función de las proteínas.
- Aminoácidos y neurotransmisores
- Enlaces peptídicos, oligopeptidos y polipeptidos
- Estructura primaria, secundaria , terciaría y cuaternaria
- Funciones de las proteínas: estructural, reguladora, de transporte, de reserva, enzimática, mensajera y de receptores químicos
Transcripción y traducción.
- Moléculas implicadas en la transcripción y traducción de las proteínas
- Fases de la transcripción de las proteínas
- Fases de la traducción de las proteínas
- Regulación de la transcripción y traducción
Síntesis y modificación de las proteínas.
- Moléculas implicadas en la síntesis y traducción de las proteínas
- Fases de la síntesis de las proteínas
- Fases de la modificación de las proteínas
- Regulación de la síntesis y modificación de las proteínas
Alteraciones conformacionales de las proteínas.
- Serpinopatías
- Proteínas priónicas
- Neuroserpinas
- Hemoglobina
- Repeticiones de glutamato
- Proteína Tau
- Inmunoglobulinas cadenas ligeras
- Proteína CFRT Péptido B-amiloide
- Superóxido dismutasa
- B2 microglobulina
UNIDAD DIDÁCTICA 4. METODOLOGÍA APLICADA A LA SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
Electroforesis.
- Tipos de electroforesis: unidimensionales, bidimensionales y técnicas relacionadas.
- Separación electroforética de las proteínas séricas. Patrones de normalidad y de alteración
- Características del material y de los reactivos. Averías o disfunciones
Técnicas cromatográficas.
- Características de los equipos. Condiciones de uso y mantenimiento
- Calibración. Averías o disfunciones
- Características del material y de los reactivos
Técnicas de inmunodetección.
- Inmunocitoquímica
- Western blot
- Inmunoprecipitación
- Co-inmunoprecipitación
- Pull-down
- TUNEL
Espectrometría de masas.
- Fundamento y aplicaciones.
- Características de los equipos.
- Condiciones de uso y mantenimiento. Calibración. Averías o disfunciones.
- Características del material y de los reactivos.
Tecnología de microarrays y chips de proteínas.
- Microarrays de ADN: Diseño de un microarrays de ADN. Tipos
- Microarrays de Proteínas: Diseño de un microarrays de proteínas. Tipos
- Microarrays de Carbohidratos: Diseño de microarrays de carbohidratos. Aplicaciones
- Microarrays de Células
- Microarrays de Tejidos
- Perspectivas de mercado de los microarrays y biochips en el área de salud humana
Bioinformática. Bases de datos de proteómica.
- Genómica funcional
- Relación entre la biología y la informática
- Biochips
- Bioinformática
- Bibliografía